BCH1039M-TP intégré-Etude des interactions de la protéine Cdk2 humaine

TP intégré se déroulant sur plusieurs semaines à la fin du Semestre 2 de M1 et utilisant les notions théoriques présentées dans les UEs du semestre 2 (UE Mécanismes moléculaires de l’homéostasie cellulaire et UE Biologie Structurale, notamment).

Le contenu de ce TP correspond notamment à:

- la mutagenèse de cdk2 et son clonage dans des vecteurs de levure

- la transformation des vecteurs (appâts et proies) dans les levures pour expression

- la pousse sur milieux sélectifs et mise en place des matrices d’interaction sur milieux de révélation du double hybride et analyse du double hybride.

- la récupération de structures 3D des complexes Cdk2/proies pour l’analyse pertinentes des interactions de Cdk2 et de ses partenaires

- l'étude structurale de Cdk2 par cristallographie aux rayon-X et par RMN

Les compétences et connaissances qui devront être maitrisées à l’issue de l’UE correspondent notamment à :

- la maîtrise des concepts expérimentaux de l’étude des interactions protéine-protéine dans un contexte appliqué.

- la maîtrise de diverses approches de biologie moléculaire, de biologie structurale et de méthodes d’étude d’interactions protéines/protéines ou protéines/ligand.

- à proposer une démarche expérimentale intégrée permettant de répondre à des questions biologiques concrètes.